蛋白浓度测定方法

　　微量凯氏定氮法：由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质溶液在280nm处具有紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度呈正比关系，因此利用这一性质可进行蛋白质定量测定。微量凯氏定氮法迅速、简便、不消耗样品、低浓度盐类不干扰测定，可测定0.1～1.0mg/mL的蛋白质溶液。

　　样品与浓硫酸共热，含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

　　CH2COOH

　　| + 3H2SO4 ? 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)

　　NH2

　　2NH3 + H2SO4 ? (NH4)2SO4 (2)

　　(NH4)2SO4 + 2NaOH ? 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3)

　　反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

　　为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。中国粮油仪器在线 http://www.grain17.com