两钟蛋白质测定方法比较

　　植物组织总蛋白质的提取方法较多,常用的方法有TCA-acetone(三氯醋酸-丙酮沉淀)法,Tris法、磷酸缓冲液(PB)法和试剂盒法等。另外,蛋白质浓度的测定方法有紫外分光光度法(UV法)、Bradford法、定氮仪法、双缩脲(Biuret)法、BCA(Bicinchoninic Acid)法、Lowry法和试剂盒法等。其中现在最常用的还数蛋白质测定仪，因为蛋白质测定仪采用凯氏定氮法，而凯氏定氮法是标准的测定蛋白质含量的方法。下面我们就PB法和Tris法做一比较。

　　采用PB法提取总蛋白,成本低,速度快,操作简单,提取量较高。但是,该法提取的总蛋白质质量差,损失了小分子量蛋白;而且,杂质含量高,电泳时杂质向泳道两侧扩散,挤压其他泳道,样品放置一段时间后有明显的杂质沉淀。因此,该法提取的总蛋白不宜用于电泳分析。

　　Tris法是比较常用的方法,成本低,速度快,操作简单,提取量高。虽然采用该法提取的蛋白质组分是完全的,但小分子量蛋白的量不如大分子量蛋白的。经过改进后,虽有所改善,但仍不理想。不过,采用改进Tris法提取总蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,效果良好。Tris碱虽可防止蛋白的水解,但由于引入盐离子,会导致IEF(等电点聚焦)电压过低,从而影响聚焦。因此,用该法提取的总蛋白不宜用于二维电泳(2-DE)分析。