四种测定蛋白质含量的经典方法比较

　　三氯醋酸-丙酮沉淀法是最为常用的总蛋白提取方法,具有降低次生代谢物质干扰、减少蛋白降解等优点。该法所提取的蛋白,浓度较高,蛋白质组分完全,各组分的量较均匀,杂质少,离子浓度小,不仅可用于一维电泳( SDS-PAGE)分析,还可用于二维电泳(2-DE)分析。只不过该法成本较高,较为耗时,操作也较为复杂。

　　PlantTotalProtein ExtractionKit试剂盒,是专门为提取各种植物组织优质全蛋白样品,以便用于植物生物科学研究而设计的。用该法提取的总蛋白,浓度高,组分完全,各组分均匀,杂质少,离子浓度小,用于SDS-PAGE和2-DE分析效果好。但是,操作复杂,成本高。为了降低成本,对此法进行了改良,主要是将蛋白酶抑制剂混合物改为PMSF;虽然不如试剂盒的效果好,但仍能获得良好效果。

　　Bradford法是常用的测定蛋白质浓度的方法,其测定结果基本上准确,而且花费低。不过当提取的蛋白质样品含有变性剂、还原剂、解离剂和两性电解质时,这些试剂可与考马斯亮蓝燃料结合,从而影响测定结果,但影响不大。

　　除了以上三种，凯氏定氮法是最为经典的，也是标准中规定的方法。其中，有凯氏定氮法衍生出来的定氮仪或者也叫做蛋白质测定仪，是测定蛋白质含量的主要仪器。该仪器具有测定速度快，同时测定多个样品的特点，因此广受欢迎。而粗蛋白测定仪正因为其自身的优势，现已成为主流的测定方法。